有问有答| 一起探讨基因合成、引物测序相关问题（分子讲座完结篇）

信息来源：k8.com 作者：genecreate 发布时间：2020-07-13 09:30:55

上期讲座Q&A
 
1、 我想问下：为什么引物不能退火之后跑胶验证纯度呢？
两条引物退火成功率达不到百分之百，里面会存在单链引物，引物退火后跑胶有杂链很正常，不能以此来判断单链引物纯度。
 
2、老师您好，我想自己设计测序引物，请问对于测序引物有什么要求吗？
在待测目的基因前面100bp左右设计引物，GC含量不能太高或太低，3’端不能有错配，引物的长度建议是18-20bp以内。
 
3、甲基化的建议反向测序,是什么意思?
正向测序有甲基化的结构，会导致测序峰图双峰或者严重的时候导致信号突然中断，就可以反向测序，然后正反双向测序结果拼接起来就可以得到完整的序列。
 
4、老师请问一个测序反应有效的大概有多长?
普通序列一个测序反应有效长度大概是800bp左右。
 
5、RNA能合多少呢
30bp以内。
 
6、稀释后引物保存时间多久？
稀释后的引物一般4℃保存3个月内是没有问题的
 
7、你们的积分的兑换时间有限制吗？
积分不清零的
 
8、测序为什么前70bp不准呢
一代测序，由于仪器的缺陷，所以前面会有几十bp是不准确的，严重的时候会有70bp左右不准确。
 
9、引物最长能合多长呢？
引物最长能合139bp。
 
10、k8.com引物合成与外面其他公司引物合成相比，优势有哪些？
我们公司技术服务内容比较多，内部和外部引物合成需求都是一起合成，效果和质量的反馈方面，我们综合有内部使用和外部使用反馈，更全面。
 
11、只做常规的pcr，用什么纯化方式的引物呢?
常规的pcr脱盐纯化就可以满足实验了。
 
12、引物测序时，单向、双向、测通之间的具体区别是什么呀？
这个主要是根据待测目的序列的长度来决定的，如果待测目的序列700bp以内的话可以选择正向或者反向都行；1500bp以内的序列一般双向测序就可以了；如果是待测目的序列大于1500bp就可以填测通，这边会根据测序结果自动安排测序反应，直到完全测通，我们会默认测通后拼接。
 
13、不同纯化方法,你们收费不一样是吗
不一样的，脱盐纯化<PEGA纯化<HPLC纯化。
 
14、k8.com收到测序样品后一般最快多久出结果？
质粒和PCR产物24小时内出结果，菌液48小时内出结果。
 
15、讲座回放和PPT怎么获取？
讲座PPT获取方式：k8.com微信公众号回复引物测序
讲座回放，扫码即可观看
 
下期讲座预告
 



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