• 专业酵母双杂交技术服务

    k8.com提供高质量酵母双杂交服务,拥有齐全cDNA文库,10年经验团队,高效筛选与诱饵蛋白存在特异相互作用的蛋白

    我们的服务优势

    k8.com酵母双杂交技术平台的核心竞争力

    齐全cDNA文库

    拥有较齐全的cDNA文库,确保筛选出与诱饵蛋白存在特异相互作用的蛋白

    10年专业经验

    由10年从事酵母表达操作的实验员组成,确保实验高效准确

    优化升级载体

    创新的三框文库构建方法,可保证片段长度、阳性率和文库滴度等信息的一致性。

    高成功率保障

    一站式辅助检测手段,多重验证确保实验结论可靠

    酵母双杂交服务实验流程优化

    高效、可靠的蛋白质互作检测系统

    实验设计
    载体构建
    酵母转化
    筛选验证
    互作验证
    数据分析
    1

    实验设计

    设计诱饵蛋白(Bait)和猎物蛋白(Prey)的表达载体,选择合适的酵母菌株和报告基因系统。确定筛选条件和对照实验方案。

    • 选择合适的载体系统(pGBKT7/pGADT7)
    • 设计特异性引物进行PCR扩增
    • 确定自激活检测方案
    • 设置阳性和阴性对照
    2

    载体构建

    将目标基因克隆到诱饵和猎物载体中,进行测序验证,确保读码框正确,无突变发生。

    • PCR扩增目标基因片段
    • 限制性内切酶酶切与连接
    • 转化大肠杆菌进行扩增
    • 质粒提取与测序验证
    3

    酵母转化

    使用LiAc/PEG方法将构建好的诱饵载体和猎物载体共转化到酵母感受态细胞中。

    • 制备酵母感受态细胞
    • 诱饵载体单独转化(自激活检测)
    • 诱饵与猎物载体共转化
    • 涂布在选择性培养基上培养
    4

    筛选验证

    在四缺培养基(SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade)上进行筛选,并通过β-半乳糖苷酶活性检测验证阳性克隆。

    • 双缺培养基初筛(SD/-Leu/-Trp)
    • 四缺培养基复筛(SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade)
    • X-α-gal显色反应验证
    • 3-AT浓度优化抑制背景生长
    5

    互作验证

    对阳性克隆进行验证实验,排除假阳性结果,确保蛋白质互作的特异性。

    • 回转实验验证互作特异性
    • 一对一互作验证
    • 点对点验证实验
    • 免疫共沉淀辅助验证
    6

    数据分析

    对实验结果进行系统分析,构建互作网络,提供详细的实验报告。

    • 阳性克隆测序分析
    • 互作强度定量分析
    • 构建蛋白质互作网络
    • 生物信息学功能分析

    服务类型对比

    根据您的需求选择最合适的服务类型

    服务项目 应用 互补实验 周期
    酵母杂交文库构建 酵母杂交筛选 - 4-6周
    核酵母双杂交筛选 获得与已知蛋白互作的未知蛋白 COIP,GST pulldown 6-8周
    膜酵母双杂交筛选 研究膜蛋白之间的互作 COIP,GST pulldown 8-10周
    酵母单/双杂交验证 已知蛋白与蛋白/启动子之间的互作 EMSA,双荧光素酶等 4-5周
    服务项目 客户提供 最终交付
    文库构建 组织/细胞 滴度在1×10cfu/mL以上的酵母文库菌液;文库PCR鉴定结果图片(阳性率在90%左右)
    文库筛选 蛋白序列/基因序列/质粒 筛选过程中的全部原始图片;筛选获得所有相互作用的猎物蛋白的测序结果

    常见问题

    关于酵母双杂交服务的疑问解答

    酵母双杂交技术适合研究哪些类型的蛋白?

    酵母双杂交技术特别适合研究核蛋白和膜蛋白的相互作用。对于核蛋白,我们使用经典酵母双杂交系统;对于膜蛋白,则采用分离的泛素系统(split-ubiquitin)技术。此外,我们还提供针对不同亚细胞定位蛋白的定制化服务方案。

    实验需要提供什么样品?

    根据服务类型不同,所需样品有所区别:

    • 文库构建:需提供组织或细胞样本
    • 文库筛选:需提供蛋白序列/基因序列/质粒
    • 验证服务:需提供诱饵和猎物重组质粒

    我们的技术支持团队会在项目启动前提供详细的样品准备指南。

    实验周期需要多长时间?

    标准服务周期如下:

    • 文库构建:4-5周
    • 核酵母双杂交筛选:6-8周
    • 膜酵母双杂交筛选:8-10周
    • 酵母单/双杂交验证:4-5周

    具体时间会根据项目复杂程度有所调整,加急服务可缩短30%时间。

    如何保证实验结果的可靠性?

    我们采用多重质控确保结果可靠:

    • 严格的自激活及毒性验证
    • 三重复实验设计
    • 阳性/阴性对照设置
    • 结果通过CO-IP或GST pulldown互补验证
    • 提供原始实验数据供客户查验

    开始您的酵母双杂交研究

    提交咨询表单,我们的技术专家将在24小时内与您联系,为您设计最优实验方案

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