分子互作 | 酵母双杂交应用

  酵母杂交技术背景  

    由Fields和Song等人最初建立的主要为酵母双杂交系统，它是一种研究真核生物细胞蛋白之间的相互作用的分子生物学技术，其后在此基础上，又进一步开发了用于研究DNA与蛋白质之间相互作用的酵母单杂交，膜定位蛋白之间相互作用的膜酵母双杂交以及RNA与配体之间相互作用的酵母三杂交等多项技术，为研究生物体内的功能作用机制提供了更加完善和严谨的研究手段。

 

  核酵母双杂交技术原理  

    酵母转录因子Gal4包含DNA结合结构域（Gal4-BD）和转录激活域（Gal4-AD），诱饵（prey）与Gal4-BD融合，猎物（bait）蛋白与Gal4-AD融合，当诱饵蛋白和猎物蛋白发生相互作用时，Gal4-BD和Gal4-AD在空间上充分接近，可呈现完整的GAL4转录因子活性，启动激活酵母菌株的报告基因AUR1-C、ADE2、HIS3和MEL1的转录，并以缺陷培养和颜色反应的结果得以呈现。

  应用方向  

核酵母双杂交应用于转录因子调控化合物的生物合成途径

转录因子NnWRKY70a和NnWRKY70b正向调节荷花中BIA生物合成[1]

 

核酵母双杂交应用于病原体破坏宿主免疫系统功能机制研究

细菌F-box效应物通过介导水稻中OsTrxh2的蛋白酶体降解来抑制SAR免疫[2]

 

膜酵母双杂交应用于胁迫环境下的抗性治疗发现

通过筛选文库得到相互作用蛋白为非肌球蛋白II型(Myo1p)功能研究提供新见解[3]

 

膜酵母双杂交应用于蛋白新功能的发现

跨膜蛋白PRA1在早期分泌阶段的功能研究方向[4]

  技术服务  

 

参考文献：

[1] Li J, Li Y, Dang M, Li S, Chen S, Liu R,Zhang Z, Li G, Zhang M, Yang D, Yang M, Liu Y, Tian D and Deng X(2022) Jasmonate-Responsiv Transcription Factors NnWRKY70a and NnWRKY70b Positively RegulateBenzylisoquinoline Alkaloid Biosesynthesis in Lotus (Nelumbo nucifera). Front. Plant Sci. 13:862915. doi: 10.3389/fpls.2022.862915.

[2] Hongtao Ji, et al. A bacterial F-box effector suppresses SAR immunity through mediating the proteasomal degradation of OsTrxh2 in rice Plant J. 2020 Nov;104(4):1054-1072.doi: 10.1111/tpj.14980. Epub 2020 Oct 14.

[3] Santiago, Ednalise; Akamine, Pearl; Snider, Jamie; Wong, Victoria; Jessulat, Matthew; Deineko, Viktor; Gagarinova, Alla; Aoki, Hiroyuki; Minic, Zoran; Phanse, Sadhna; San Antonio, Andrea; Cubano, Luis A; Rymond, Brian C.; Babu, Mohan; Stagljar, Igor; and Rodriguez-Medina, Jose R., "Novel Interactome ofSaccharomyces cerevisiae Myosin Type II Identified by a Modified Integrated Membrane Yeast Two-Hybrid (iMYTH) Screen" (2016). Biology Faculty Publications . 106.

[4] Ameair Abu Irqeba,Judith Mosinger Ogilvie(2019). Novel binding partners forPrenylated Rab Acceptor 1 identified by a split-ubiquitin yeast two-hybrid screen. http://doi.org/10.1186/s13104-019-4219-y.